宁波美康生物科技有限公司
关键词：糖化血红蛋白；糖化白蛋白；糖基化差距
糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一个慢性的全身性代谢性疾病，是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即"三多一少"症状，DM一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且不易治愈[[i]]。DM治疗关键是血糖水平的控制与稳定，临床监测的实验方法学一般包括血/尿葡萄糖试验、糖耐量试验、糖化蛋白试验等[[ii]-[iii]]。其中血/尿葡萄糖试验和糖耐量试验已被普遍采用，而糖化蛋白试验可为较长时间段的血糖浓度提供回故性评估，而不受短期血糖浓度波动的影响，因此越来越受到临床重视[2-3]。
1、糖化蛋白的概念
糖化蛋白是指血液中已糖通过非酶促作用，将糖基加到蛋白质的氨基酸基团上形成的不可逆糖蛋白结合物。葡萄糖与蛋白质首先形成一种不稳定的葡基胺（Glycosylamine）或者Schiff碱基（Schiff Base），后者再经不可逆的葡糖胺（Amadori）重排反应形成稳定的氨基酮（酮胺）[[iv]]。其反应顺序如图1所示。血液中酮胺的含量与血浆中葡萄糖的水平是成比例的[4]。
体内各种蛋白质均有可能被糖基化而改变其功能，细胞外的血红蛋白（hemoglobin， Hb）最易糖基化，除了Hb，葡萄糖也可通过非酶促糖基化反应与其他蛋白（如清蛋白，膜蛋白，晶状体）结合形成酮胺[[v]]。
2、酶法糖化白蛋白的概念
酶法使用蛋白酶将血清蛋白消化成低分子量的糖化蛋白片段（glycated protein fragments，GPF），随后使用果糖氨基酸氧化酶催化产物GPF发生氧化反应生成氨基酸，葡萄糖醛酮和H2O2。释放的H2O2通过终点反应比色法来测定，其吸收值与GSP的浓度成比例[[vi],[vii]]。该法检测方便，可靠，易于自动化，且不受内源性还原物质干扰，适于临床大规模推广应用，但其检测易受球蛋白成分、蛋白质浓度影响，并且糖化氨基酸输液会对其产生干扰。
酶法GA测定的是白蛋白被糖化的部分，其原理与酶法GSP类似，不同之处在于其通过偶联对GA特异的果糖氨基酸氧化酶来实现其高特异性。由于其高特异性的对GA进行测定，通过同时测定样本中总白蛋白的含量，可以获得GA占白蛋白的百分率，与mmol/L相比，虽然这种表达方式的益处或优势仍存在争议，但是当用HbA1c%作类比，GA%显然能更容易被理解。新近研究证实，就糖尿病患者的血糖控制而言，GA%比HbA1c%能更好地预测患者死亡和住院治疗的风险[[viii]]。GA酶法试验不受球蛋白成分、蛋白质浓度，糖化氨基酸输液及内源性还原物质干扰，能准确测定人血清或血浆中GA含量[23,24]。该法试剂盒可在多数自动生化分析仪上运行使用，还具备良好的精密度、准确度、线性以及稳定性。目前采用的液体稳定试剂与先前测定GA的第一代冻干粉末试剂相比，使用更方便，但稳定性两者可以媲美。
3、糖化蛋白临床应用
3.1、 HbA1c和GA的临床应用
DM是一组病因和发病机制尚未完全阐明的内分泌代谢疾病，以高血糖为其主要标志。国内目前对DM诊断及病情检测主要是依靠血糖浓度测定[1]。由于血糖含量易受饮食、药物等影响，不能客观反映人体内血糖真正水平并且一天中体内血糖的变化很大，因此血糖检测不能用于反映一段时间内血糖控制的程度，而糖化蛋白不受短期血糖浓度波动的影响，可为较长时间段的血糖浓度提供回故性评估，因此作为糖尿病监测和血糖控制效果评估的理想生化指标已越来越受到临床的重视[2,3]。
临床上，HbA1c可作为DM患者血糖控制的一个"金标准"，其浓度与红细胞寿命（平均120天）和该时期内血糖的平均浓度有关，反映的是过去8～l2周的平均血糖水平。根据检测结果，临床医师可以采用饮食控制或有效药物等方法来制定治疗方案[3,6]。对妊娠期糖尿病，HbA1c在判断是否致畸、死胎和子痫前期更有意义，故其是妊娠期糖尿病控制的重要参数[[ix],[x]]。在儿童糖尿病中，存在糖尿病典型症状但随机血糖<11.1 mmol／L的疑似患者中建议检测HbA1c[[xi]]。
相对而言，血糖与GA的结合比Hb容易且快速，由于白蛋白的半衰期为17~19 d，所以GA值反映的是糖尿病患者测定前2~3周平均血糖浓度 [2,3]，因此在糖尿病患者降糖治疗过程中，GA浓度的变化早于HbA1c的改变，故对于糖尿病患者治疗方案调整后疗效的评价，GA比HbA1c更具有临床参考价值，适合于观察血糖短期、中期变化情况[34,[xii]]。与HbA1c相比，其更新不受Hb变异和红细胞更新率的影响，能在血糖变化最显著时更确切和及时地反映血糖水平，尤其适用于血糖波动较大的新诊断患者降糖治疗时的疗效观察。在一些特殊情况下，如透析性的贫血、急性全身性疾病期、肝病、糖尿病合并妊娠、降糖药物调整期等，GA更能准确反映短期内的平均血糖变化[34,39]。此外，GA检测可鉴别糖代谢紊乱是糖尿病并应激还是单纯应激状态，这对于临床医生判断病情、指导治疗及监测病情有重大的临床意义，在测定血糖的同时测定GA能更有助于客观、准确、可靠地评估糖代谢状态[34,39]。
3.2、糖基化差距（Glycation Gap，GG）
作为糖尿病诊断和血糖监控的"金标准"，HbA1c是检测数周乃至数月平均血糖水平的一项有力指标，但其准确性受许多因素影响。对一部分糖尿病患者来说，HbA1c水平并不能准确地反应出他们的平均血糖水平及糖尿病并发症[[xiii],[xiv]]。研究发现，因基因、年龄等一些非糖类作用因素的影响，个体间的HbA1c存在相当大的差异，如美国墨西哥人和黑人的平均HbA1c值要高于白人[25,26]，此外，HbA1c值随着年龄的增长而增加[25,26]。在DCCT试验中，HbA1c之间的差异并非因其平均血糖水平不同而引起的占33%，在糖尿病患者中HbA1c差异有21%不能由平均血糖含量来做出相应的解释[[xv]]。
由于HbA1c在红细胞内的合成进程是缓慢连续进行的，任何使红细胞寿命缩短的情况都会导致HbA1c形成的时间也相应缩短，致使检测结果也受到影响[25]，如HbAlc的变异体及衍生物（如遗传性变异产生的糖化血红蛋白S、糖化血红蛋白C、肾功能不全患者体内形成的氨基乙酰化Hb、大量服用阿司匹林患者体内形成的乙酰化Hb等），红细胞生存周期缩短（如大量失血或溶血性贫血的患者）以及其他因素（如摄入维生素E、维生素C、缺铁性贫血等）[25]。
为了解决GHb与平均血糖间的差异，McCarter[[xvi],[xvii],[xviii]]等提出了血红蛋白糖化指数（hemoglobin glycation index，HGI）的概念，HGI为HbA1c实际测得的值与通过平均血糖值预测得到的值之间的差异，根据对DCCT数据库的分析，McCarter等发现HGI与发生糖尿病视网膜病变及肾病并发症的危险有关，通过综合考虑HbA1c和HGI这两项因素，可以预测某一特定糖尿病个体的微血管并发症危险[[xix],[xx]]。
由于准确测量平均血糖值存在一定困难，Robert Cohen[[xxi]]提出了替代方案，即GG评价，它被定义为HbA1c实际测得的值与通过GA值预测得到的值之间的差异。通过对1型和2型糖尿病患者的研究发现，GG能有效地预测糖尿病肾病的发展甚至是在对HbA1c进行校准之后，同时GG与GA之间也保持着独立的关系[[xxii]]。Rodriguez-Segade在其最新的研究中总结道，GG和GA分别是糖化水平非糖及有糖参与决定因素的评价指标，联合运用GG和GA来评价糖基化水平可以提高对糖尿病肾病风险性及血糖控制的评估[[xxiii]]。研究发现，中、高GG组患肾病的风险分别是低GG组的1.6和2.5倍[35]。因GG同时涉及到HbA1c及GA信息，一些研究证实比起单独检测HbA1c，GG能更加可靠地预测糖尿病并发症包括肾病和视网膜病，因而提高了检测的准确性[38]。
为了更好地对糖尿病及血糖控制情况进行监测，GA已成为一项必不可少的检测项目，其研究正获得临床极大的支持[[xxiv],[xxv]]。GA并不是HbA1c检测的替代品，但却是HbA1c的补充，两者的共同检测可提高糖尿病的诊断和血糖水平的监测，尤其对于那些HbA1c水平不能真实反应平均血糖水平或存在GG的糖尿病患者。
4、关于糖化白蛋白GA酶法检测试剂盒（About GA Test Kit）
预期用途（Intended Use）：
GA酶法试剂与校准品应用于血清样品中糖化白蛋白（GA）的定量测定，而GA的测定有利于监测糖尿病患者的病况。本试剂仅应用于体外诊断试验。
糖化白蛋白GA酶法检测试剂盒检测原理（Assay Principle of GA）
酶法试验检测糖化白蛋白（GA），首先用蛋白酶K将血清蛋白消化成低分子量的糖化蛋白片段（glycated protein fragments，GPF），随后使用果糖缬氨酸氧化酶（fructosaminaseTM），即微生物源的amadoriase酶催化Amadori产物GPF发生氧化反应生成PF（或氨基酸），葡萄糖醛酮和H2O2。释放的H2O2通过终点反应比色法来测定，其在600nm处的吸收值与GA的浓度成比例。
产品特性（Product Features）：
简便（Convenient）：
·独特的稳定液体双试剂
性能（Performance）：
·比NBT法测定果糖胺具备更好的特异性和准确性
·线性范围：21-1354umol/L
·批间和批内CV：＜1.3%
·灵敏度：13.0umol/L
·良好的相关系数：r2＞0.99
·干扰物质（＜10%变化）：
抗坏血酸 5mg/dl
胆红素 7.5 mg/dl
结合胆红素 5 mg/dl
葡萄糖 2400 mg/dl
血红蛋白 200 mg/dl
尿酸 35 mg/dl
甘油三酯 2000 mg/dl
稳定性（Stability）
·2-8℃储存12个月
适用性（Flexibility）
·血清或血浆
GA测试在文献记载中被应用于（ GA test used in literatures for）
·糖尿病的监测及控制，尤其是有以下情况的患者：
·妊娠糖尿病
·溶血性贫血或失血
·血液透析或腹膜透析
·GG的测定
·快速鉴定食物或药物调理治疗的效果
·是应用糖化血红蛋白诊断及筛选糖尿病的补充，两种方法的同时使用将提供更确凿更精确的结果
参考范围（Reference Range）
糖化白蛋白值：11～16%，此数据来源于120位健康人的检测结果，并参考相关文献，仅供参考。建议各实验室建立自己的参考值范围。
参考文献：中华内科杂志2009年6月第48卷第6期《糖化血清白蛋白正常参考值的多中心临床研究》 。
糖化白蛋白值升高见于糖尿病。成人（20-60岁）报道的正常范围在100-285umol/L之间。建议各实验室建立自己的参考范围来反应不同年龄、性别、饮食习惯和居住环境的人群。
试剂盒配置和订购信息（Kit Configuration and Ordering Information）
宁波美康生物科技有限公司糖化白蛋白试剂（GA）包装规格，其配置参数如下：
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配置 Configuration
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试剂规格kit size
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标准品
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质控品
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通用型（Universal）
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GA
R1:2×40mL
R2:2×10mL
ALB
R3:3×40mL
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2×1mL
（标配）
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2×1mL
（可选购）
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贝克曼（Beckman）
|
GA
R1:1×80mL
R2:1×20mL
ALB
R3:1×120mL
|
2×1mL
（标配）
|
2×1mL
（可选购）
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德灵（Dade）
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6×60T
|
2×1mL
（标配）
|
2×1mL
（可选购）
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