第二节          血源安全检测项目及技术

血站血液采集作为社会血液供给的最主要来源，对于血液安全健康具有不可推卸的责任，所以确保血源健康安全是血站采供血机构重要任务，血源安全检测是保证血源健康安全重要环节之一。

一、        检测项目

大力开展无偿献血，对献血者必须进行谷丙转氨酶(ALT)、HBsAg、抗HCV检测。核酸血液筛查可大大提高血液安全性，特别是提高对我国较为复杂的HBV 低滴度感染标本的检出能力。（内容源自：核酸血筛在献血者常规筛查中的应用研究*曾劲峰1 许晓绚1 李活1 叶贤林1 陈华2△ 曹玉峰2( 1. 深圳市血液中心，广东深圳518035; 2. 上海科华生物技术有限公司）

依据2015板血站技术操作规程规定，血站采供血机构输血相关传染病的检测项目有：

1. 人类免疫缺陷病毒（HIV）感染标志物包括①人类免疫缺陷病毒核酸；②人类免疫缺陷病毒1型抗体（抗HIV-1）和人类免疫缺陷病毒2型抗体（抗HIV-2），或者抗HIV-1、抗HIV-2和p24抗原（HIV Ag/Ab）；

2．乙型肝炎病毒（HBV）感染标志物包括：①乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）；②乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）；

3．丙型肝炎病毒（HCV）感染标志物包括：①丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA);②丙型肝炎病毒抗体（抗HCV），或者HCV抗原和抗体（HCV Ag/Ab）；

4．梅毒螺旋体感染标志物：梅毒螺旋体特异性抗体（抗TP）；

5. 丙氨酸氨基转移酶（ALT）；

6．国家和省级卫生计生行政部门规定的地方性、时限性输血相关传染病标志物（如:HTLV等）。

在血液制品行业，因血液和血液制品在急救治疗和防病中的重要作用，确保液和原料血浆的安全，最大限度地降低经血传播疾病的危险。涉及相关检测项目除了上述的常规项目外，还涉及HCV、HDV、HTLV、CMV、EBV、B19 (Humanparvovirus)等

二、        检测方法及检测策略

依据2015板血站技术操作规程规定，检测方法包括：

1．核酸扩增检测技术包括转录介导的核酸扩增检测技术（TMA）、实时荧光聚合酶链反应（PCR）；

2．血清学检测技术，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫分析试验（CLIA）；

3. 速率法（湿化学法）。所以从事血源检测试剂生产的试剂厂家与血源安全检测息息相关。

检测策略

（1）实施核酸检测试剂批签发之前，HIV、HBV和HCV感染标志物应采用2遍血清学检测和1遍核酸检测，血清学检测应采用2个不同生产厂家的试剂；实施核酸检测试剂批签发之后，HIV、HBV和HCV感染标志物应采用核酸和血清学检测2种方法各进行1次检测。对于酶免检测阳性的标本可不再进行核酸检测，直接视为该项目检测结果不合格。

（2）梅毒螺旋体感染标志物采用2个不同生产厂家的血清学检测试剂进

行检测。

（3） ALT采用速率法（湿化学法）进行1次检测。其中血源筛查中核酸扩增检测技术对于隐匿性乙肝、免疫沉默。缩短了乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒检测的窗口期。

献血时，会遇到处于“窗口期”的献血者。“窗口期”是指部分献血者已经感染了HBV或HCV，在一段时间内抗HBV或抗HCV尚未产生。目前检测献血者常规检测不能检出。应用核酸技术进行检测科缩短“窗口期”，但并不能消除“窗口期”。筛选献血者的血清学检测方法不敏感。

三、        核酸检测的优势

控制输血相关传染病的传播已成为全社会关注的焦点，虽然现行的国家法定HBsAg 及HCV、HIV抗体的血清学ELISA 筛查检测大大降低了输血传染病毒风险，但由于我国是肝炎的高发区，HBsAg携带率为9. 09%，HBV 流行率高达60% 以上，抗-HCV 阳性也在3. 2%［1］，艾滋病亦处于快速发展趋势，目前的ELISA 检测试剂灵敏度难以杜绝输血风险，报道的HCV RNA 阳性与LISA 阴性比率为0. 01% ～ 0. 19%，HBV DNA 阳性与ELISA 阴性比率0. 4% ～ 0. 92%，大大高于国外献血者检出率［2，3］，输血血源质量存在极大隐患，主要原因在于病毒感染献血者的“窗口期”漏检现象。（内容源自：核酸血筛在献血者常规筛查中的应用研究*曾劲峰1 许晓绚1 李活1 叶贤林1 陈华2△ 曹玉峰2( 1. 深圳市血液中心，广东深圳518035; 2. 上海科华生物技术有限公司）

近年来,随着以核酸扩增检测技术（NAT)为代表的分子生物学技术在血液筛查方面的应用, 输血及血液制品安全性有了很大的提高, 从理论上该技术能显著地缩短病原体检出的“窗口期”, NAT检测HBV、HCV、HIV病毒的窗口期较抗体检测分别提前9天、25天和14天[2]。这一技术将在我国的血液中心、血库和血液制品生产企业逐步得到广泛的应用和推广

 (兰州生物制品研究所, 兰州　730046) 核酸扩增检测技术用于血液和原料血浆筛查的进展 周海云, 杨庆梅综述;张云涛审校

第三节         血源安全检测领域学术、技术和产品的国内外发展状况

1、            谷丙转氨酶(ALT)检测技术方法学进展

谷丙转氨酶(ALT)主要存在肝细胞中。ALT在健康人群中，血清含量很低，当肝脏发生病变损害时，肝细胞质内的ALT因肝细胞膜的通透性增强而释放到血液中，导致血液中的ALT含量升高。ALT的升高大致可分为病理和非病理因素。病理因素包括肝脏本身疾病；其他含有ALT的脏器组织如心、肾、脑等，如果出现病变，也可在血液中出现ALT异常；如果ALT排除的管道出现梗阻如胆管、胆囊和胰腺，均可使ALT升高。生理因素包括重度脂肪血、、感冒、饮酒、药物、剧烈运动、睡眠不足、体质量超标等引起的非特异性升高。另外也会因性别、年龄、职业、季节等有关。另外，血样的运输、保存、温度等多种条件也可引起ALT的升高，如夏季温度相对较高，采集后的血液容易导致离体的血细胞糖酵解代谢增强，进而引起酮体过多，造成ALT升高。

谷丙转氨酶(ALT)检测的临床意义随着检测技术的发展也产生了一些变化。国内外许多文献介绍ALT异常与抗-HCV和HBV表面抗原的阳性有一定相关性，ALT的异常升高与输血引起的肝炎有平行关系。在对HBV和HCV特异性检测技术不成熟的情况下，ALT对预防HBV和HCV输血有一定的预防作用。对于HBV检测而言，随着酶联免疫吸附技术已趋于成熟；HBV-DNA核酸检测技术应用；对于HCV检测而言，随着第二三代抗-HCV的特异性酶联免疫吸附检测方法的提高，将窗口期缩短至6周；以及HCV-DNA核酸检测技术应用。在某种程度上，ALT血筛在核酸检测未开展地区仍然起到一定的避免漏检作用。

谷丙转氨酶(ALT)检测技术方法学有四种即层析法、比色法、速率法（又称连续检测法或动力学法）、荧光法。比色法影响因素较多，敏感性和特异性较差，不需要特殊仪器检测，检测试剂相对便宜；速率法与比色法相比，检测结果相对准确，且需要生化分析仪，对试剂的要求也相对较高。自从中国1997年颁布的《输血技术操作规程》中新增速率法之后，目前国内多数血液机构都使用大型生化分析仪，采用速率法检测。

美国取消了对ALT的筛查项目，许多国家和地区也取消了对ALT的筛查。中国属于肝炎高发国家，尤其在某些地区暂无开展核酸检测技术，对ALT的筛查是提高血液质量的一个保障，进而保证血液质量，保障临床充足的血液供应。

2、            丙型肝炎病毒技术方法学进展

  丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）感染引起的病毒性肝炎，主要经输血、针刺、吸毒等传播。丙肝的传播途径与乙肝、艾滋病相同，但因公众对丙肝的了解度相对较低，且感染基本无症状，因而造成的危害相对更大。丙型肝炎呈现全球性流行，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌。丙肝与乙肝不同，没有预防疫苗，控制传染源和阻断传播途径是最有效的方式。因此，早诊断早发现HCV感染者是预防丙型肝炎的重中之重。

由中华人民共和国卫生行业标准制定的《丙型病毒性肝炎筛查及管理Screening and management of viral hepatitis C》中提及丙型肝炎病毒检测方法学分血清学检测，应选择择ETA法或CIA法检测抗一HCV；HCV核酸检测，RT-PCR用于检测HCV RNA，阳性者提示病毒复制。其检测的临床意义如下：

表1 HCV检测结果的解释

抗-HCV检测方法包括酶联免疫吸附试验、化学发光免疫法、重组免疫印迹法（RI-BA）、免疫层析法以及蛋白芯片检测法（用于抗-HCV的分型）等。

HCV-RNA检测包括定性和定量两种检测方法。临床检测主要是定量检测，疗效分析；血筛用于病原体的定性筛查。HCV RNA的定性检测主要用核酸扩增技术检测血中的RNA。如扩增技术有逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）或转录介导扩增术（TMA）。定性检测主要用于急慢性丙型肝炎的确诊。HCV RNA的定量检测主要有定量TR-PCR、分支链DNA信号放大技术（d DNA）、实时荧光定量PCR。定量检测主要用于检测HCV RNA的动态水平，对抗病毒治疗的选择与疗效检测有重要作用。

 HCV抗原检测，主要是对HCV核心抗原（HCV c AG）进行检测。美国Ortho公司使用的双抗体夹心法定性或定量检测血清中总的或游离的HCV c AG的ELISA试剂。2003年巴黎召开的有关HCV c AG检测技术的第一届专题会认为，该试剂对HCV c AG的检出比抗-HCV的检出约早49天，可用于血筛，进而提高了输血的安全性。引用 血液筛查中常用的丙型肝炎病毒检测方法 任静 韩卫 文章编号1004~2806（2011）06-0363-04

 日本是最早对血液进行HBV、HCV、HIV进行核酸检测的国家。英国、法国、德国、新加坡、中国香港也相继采用不同检测方式对血液进行核酸筛检。2013年，国家卫生和计划生育委员会制定并印发的《全面推进血站核酸检测工作实施方案（2013~2015）》。此方案的强力推动有助于进一步保障我国的用血安全。